温度応答型HRPナノカプセルによる効率的な酵素固定と回収

Wei Wei ,  

Juan-juan Du ,  

Ming Yan ,  

Jun-rong Yu ,  

Lei Chen ,  

Zu-ming Hu ,  

摘要

辛み大根ペルオキシダーゼ（horseradish peroxidase, HRP）をターゲットタンパク質、N-イソプロピルアクリルアミド（NIPAM）を単量体として、in situ沈殿重合法により37 ℃、NIPAMとHRPの質量比が6：1の条件下で粒子径13.7 nm、ゼータ電位（-3.7 ± 0.3）mVの温度応答型辛み大根ペルオキシダーゼナノカプセル（nHRP）を調製した。マトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間質量分析計（MALDI-TOF MS）、透過型電子顕微鏡（TEM）、動的光散乱（DLS）、紫外可視分光光度計（UV-Vis）により、HRPの修飾度、nHRPの微細構造、粒子径、触媒活性、温度応答特性および熱安定性を評価した。研究の結果、調製した辛み大根ペルオキシダーゼナノカプセルは単分散性が良好で、環境温度が33 ℃を超えるとnHRPは応答変化を示し、粒子径が著しくかつ可逆的に変化した。nHRPはHRP原酵素に比べ熱安定性が著しく向上し、50 ℃でnHRPを高速遠心分離することで酵素を繰り返し効率よく分離・回収できた。

关键词

温度応答; ナノカプセル; N-イソプロピルアクリルアミド; 酵素固定; 酵素回収

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